Tinción de Golgi

Neurona espinosa mediana del estriado tratado con impregnación argéntica de Golgi. Se contarán las espinas dendríticas en dendritas secundarias a lo largo de 10μm a partir de la primera bifurcación.

Del tejido del telencéfalo inmediatamente posterior al seleccionado para obtener el cuerpo estriado para la prueba inmunocitoquímica, se secciona una porción coronal de aproximadamente 300μm de espesor que contenga parte del cuerpo estriado de cada cerebro. Se lavan en PBS y se sumergen en una mezcla de tetraóxido de osmio-dicromato de potasio (1g de OsO4 y 8g de K2Cr2O7 en 300ml de agua bidestilada) por siete días a temperatura ambiente en obscuridad.

Aproximadamente 10ml de la solución por corte.

•Después de una semana se hacen 3 lavados con nitrato de plata al 0.75% (0.75g de nitrato de plata al 0.75% (0.75g de nitrato de plata / 100ml de agua bidestilada). La solución cambia a color rojizo inicialmente aclarándose en los últimos lavados. Se conservan por 24 horas a temperatura ambiente en la misma solución en oscuridad en un recipiente bien cerrado.

•Una vez retirado el exceso de nitrato de plata con papel filtro, los cortes se encastran en un bloque de parafina, para poder realizar los cortes coronales en el microtomo de aproximadamente 120μm de espesor. La parte expuesta del tejido se baña constantemente con alcohol al 95% a la vez que se lubrica la cuchilla durante el corte. El tejido es muy frágil por lo que debe procurarse el mayor cuidado posible.

•Los cortes se tratan en una batería de cajas de petri como sigue: deshidratación en dos baños de alcohol absoluto de 10 minutos cada uno; aclaración en un baño con esencia de clavo durante 10 minutos y dos baños en xilol como medio intermediario con la resina.

•Montaje en portaobjetos, aplicación de resina sintética para microscopía de luz y colocación de cubreobjetos sin dejar burbujas.