Perfusión para una rata:

Preparación de 200 ml de Fijador de paraformaldehído y glutaraldehído al 2% (A+B) y 200 ml de solución salina isotónica al 9% (C).

Solución A y Buffer PBS                                    Solución B

Reactivo                        Cantidad                    Reactivo                   Cantidad

Agua Destilada                150 ml               Agua destilada                 100ml

Fosfato monobasico        0.612 g              Paraformaldehido               4g

Fosfato Dibásico              3.534 g             Hidróxido de Sodio           2 a 3 hojuelas

Cloruro de Sodio              0.208 g             Glutaraldehido al 50%       8ml

Para la preparación de la solución A se pesan las cantidades especificadas y se mezclan homogéneamente.

Una vez preparada, se toman 50ml de esta solución y se le agregan 50 ml de agua destilada para obtener una solución a 0.1M que se ajusta a Ph=7.4 (Buffer PBS) para utilizarlo en los en los lavados del tejido en la prueba inmunocitoquímica anti-TH. Los 50ml restantes son la solución A, que se mezclará con la solución B para la preparación del fijador.

La solución B se prepara calentando los 100 ml de agua destilada a 50º C para facilitar la disolución del hidróxido de sodio y el paraformaldehído. Una vez que se obtiene una mezcla homogénea transparente se enfría a 24º C y se agrega el glutaraldehído. La solución resultante es B, ésta se mezcla con la solución A para obtener el fijador a 0.1 M. El Ph se ajusta a 7.4; puede hacerse agregando pequeñas cantidades de una solución de hidróxido de sodio si la mezcla es muy ácida, o de ácido clorhídrico si es muy básica.

Solución C (Salina al 0.9%)

En 200 ml de agua destilada se disuelven 1.8 g de cloruro de sodio.

Una vez preparado el fijador se coloca en un extremo de la bomba peristáltica y se comienza a bombear antes de iniciar la perfusión hasta eliminar burbujas de aire en el dispositivo. Posteriormente se coloca en el otro extremo la solución salina y se repite el procedimiento para eliminar burbujas.

La perfusión inicia con el bombeo de la solución salina y posteriormente del fijador. Ya extraídos los cerebros, se conservan en un vial de cristal conteniendo fijador por lo menos un día en refrigeración.