Los fragmentos del cuadrante dorsomedial de la cabeza del estriado y de la SNc se lavan en PBS, y se colocan durante una hora en tetraóxido de Osmio al 1% preparado con PBS para la postfijación; posteriormente los fragmentos se lavan con PBS en tres cambios de 10 minutos cada uno. El segundo paso consiste en la deshidratación del tejido con alcoholes en concentraciones crecientes (del 50 al 96 %) durante lapsos de 10 minutos cada uno y finalmente, el tejido se coloca en alcohol al 100 % por tres ocasiones de 10 minutos cada una para poner el tejido en tolueno durante dos períodos de 10 minutos cada uno. Los tejidos se infiltran en una mezcla de resina 1:1 araldita-tolueno a 60 °C. Se mantienen por 12 horas en una mezcla 3:1 de araldita-tolueno a temperatura ambiente, los fragmentos ya infiltrados se incluyen en araldita pura a 60 °C durante 24 horas.

Una vez que se polimerice la resina, se realizan los cortes finos de 900 Å en un ultramicrotomo Reichert-Jung utilizando cuchillas de diamante. Se montan los cortes en rejillas de cobre y se contrastan en acetato de uranilo al 5 % durante 20 minutos y con citrato de plomo al 0.4% por 5 minutos. Los cortes se observan en un microscopio electrónico Jeol Jem 100 CX II y se lleva a cabo el análisis ultraestructural, realizando las mediciones directamente en la pantalla (checar foto).

Análisis

Se toman fragmentos del estriado ipsi y contralateral a la lesión para  el procesar con la técnica para microscopía electrónica de transmisión. El análisis consiste en:

– En la medición de 50 botones presinápticos (eje mayor y eje menor).

– Estructura postsináptica (espina (cabeza o cuello) o dendrita).

– Número de sinapsis perforadas