Los experimentos se realizan en ratas macho de la cepa wistar con un peso de 120 ± 10 gr. y ratones de la cepa CD-1 con un peso de 30 ± 5 gr. Se anestesian profundamente con éter y se decapitan, se extrae el cerebro, y se coloca en solución fisiológica (Krebs) (1) a una temperatura de 2-4º C, con burbujeo constante con carbógeno durante 30 seg. aprox. Posteriormente se cortan y retiran los bulbos olfatorios y cerebelo, se hace un corte coronal a nivel del núcleo estriado y finalmente se fijan ambas partes del cerebro en la platina del  vibratomo de deslizamiento. Se obtendrán cortes coronales con un grosor de 100 µm, donde se encontraran los siguientes núcleos: mesencéfalo (sustancia nigra), hipocampo, Rafe dorsal, Globo Pálido, Corteza motora y corteza frontal, núcleo estriado, cerebelo y Locus coeruleus.

VANADIO.- las rebanadas se incubarán durante una hora en pentaoxido de Vanadio (V) (0.02 M).

MANGANESO.- Las rebanadas se incubaran por una hora en la mezcla de MnCl2/Mn(OAc)3 (0.04 M de MnCl2 y 0.02 M de Mn(OAc)3).

Posteriormente las rebanadas de ambos tratamientos se fijarán en paraformaldehido al 4% por una noche. Al día siguiente se procederá a realizar  la técnica inmunohistoquímica para TH (Tirosina-hidroxilasa) en el caso de la sustancia nigra y  Neuro-N para el resto de los núcleos y finalmente se montarán en portaobjetos gelatinizados para contabilizar el número de neuronas viables.

1. – Aghajanian, G. K. and Rasmussen, K. (1989). Intracellular studies in the facial nucleus illustrating a simple new method for obtaining viable motoneurons in adult rat brain slices.Synapse.1989; 3(4):331-8.